課程內(nèi)容

《微生物的實驗室培養(yǎng)》
（一）培養(yǎng)基
閱讀教材P14-P15相關內(nèi)容，回答以下問題：
1、何為培養(yǎng)基？
2、按照培養(yǎng)基物理形態(tài)，培養(yǎng)基有哪些種類？
液體培養(yǎng)基：表面生長、均勻混濁生長、沉淀生長
固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔
菌落：單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，叫做菌落。
菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。
菌落：細菌的菌落特征因種類而異
3、不同的培養(yǎng)基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些營養(yǎng)元素？有何作用？請舉例說明。（教材P15）
（二）無菌技術
4、何為無菌技術？無菌技術包括哪些方面？
5、什么是消毒？滅菌？兩者有何區(qū)別？
6、常見的消毒與滅菌的方法有哪些？有何要求？
7、請說出干熱滅菌法和高壓蒸汽滅菌法的操作步驟。
1、概念
無菌技術又稱無菌操作，泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。
2、消毒和滅菌
1）消毒：使用溫和的物力或化學方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物。（不包括芽孢和孢子）
2）滅菌：使用強烈的物理或化學方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物。（包括芽孢和孢子）
3）防腐：防止或抑制微生物生長繁殖的方法。
3、常用的消毒與滅菌的方法
（1）消毒的方法
①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min
②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min
③化學藥劑消毒法：用75%酒精進行皮膚消毒；用氯氣消毒水源等
④紫外線消毒
（2）滅菌的方法
①灼燒滅菌
②干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。
③高壓蒸汽滅菌：100kPa、121℃下維持15~30min。
實驗操作——大腸桿菌的純化培養(yǎng)
（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基
計算——稱量——溶化——調(diào)PH值——滅菌——倒平板（冷卻至50℃）
（二）純化大腸桿菌
1、平板劃線接種
1、操作開始時灼燒接種環(huán)：
避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；
每次劃線前灼燒接種環(huán)：
殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。
劃線結束后灼燒接種環(huán)：
及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。
2、在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻再進行劃線？
以免接種溫度太高，殺死菌種。
3、在作第二次及其后的劃線操作使，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？
劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落
2、稀釋涂布平板法
菌種的保存
1、臨時保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存。
2、長期保存：甘油冷凍管藏法